Reseña
Estado actual de la congelación lenta y la
vitrificación de embriones. Perspectivas futuras
Current status of slow freezing and vitrification of embryos. Future
prospects
Helena Navarro Quevedo *
*Centro de
Investigaciones para el Mejoramiento Animal de la Ganadería Tropical, La
Habana, Cuba.
Correspondencia: hnavarroquevedo@gmail.com
Recibido: Diciembre, 2024;
Aceptado: Enero, 2025; Publicado: Febrero, 2025.
Antecedentes: La crioconservación de embriones es la tecnología que
permite su almacenamiento a bajas temperaturas por periodos extensos de tiempo.
Esta técnica posibilita la extensión de los programas de mejora genética y la
conservación de razas y especies en peligro. Ojetivo. Describir el estado actual de la congelación lenta y la
vitrificación de embriones de interés ganadero y sus perspectivas futuras. Desarrollo: Debido a la demanda actual
de la industria ganadera, es necesaria la aplicación de una técnica de
crioconservación eficiente, sobre todo en aquellos embriones producidos in vitro, ya que poseen una menor criotolerancia. Los
procesos más utilizados son la vitrificación y la congelación lenta son, aunque
ambas técnicas poseen sus ventajas y limitaciones. Conclusiones: La vitrificación es una técnica económica y rápida,
que evita los daños físicos provocados por la formación de los cristales de
hielo; sin embargo, requiere de un mayor entrenamiento por parte del operador y
no posee una alta estandarización como la congelación lenta. Además, la técnica
de descongelación se adapta más a las condiciones de campo que la
desvitrificación.
Palabras
claves: congelación,
crioconservación, embriones, ganadería, vitrificación
(Fuente: AGROVOC)
Background: Cryopreservation of
embryos is the technology that allows their storage at low temperatures for
extended periods of time. This technique makes it possible to extend genetic
improvement programs and conserve endangered breeds and species. Objective. Describe the current state
of slow freezing and vitrification of embryos of livestock interest and its
future perspectives. Development:
Due to the current demand of the livestock industry, the application of an
efficient cryopreservation technique is necessary, especially in those embryos
produced in vitro, since they have a lower cryotolerance. The most used
processes are vitrification and slow freezing, although both techniques have
their advantages and limitations. Conclusions:
Vitrification is an economical and fast technique that avoids physical damage
caused by the formation of ice crystals; However, it requires greater training
on the part of the operator and does not have a high standardization like slow
freezing. Furthermore, the thawing technique is more adapted to field
conditions than devitrification.
Keywords: freezing, cryopreservation, embryos,
livestock, vitrification (Source: AGROVOC)
INTRODUCCIÓN
Como resultado de los avances biotecnológicos y
debido a la importancia económica que posee la ganadería, en el año 2020 se
alcanzó una producción de cerca de 1,6 millones de embriones a nivel mundial;
entre especies bovina, ovina, caprina, equina, cérvido y camélido. De los
cuales, el 76,2% de los obtenidos en el ganado vacuno se produjeron in vitro;
mientras que las cifras alcanzadas en otros grupos por esta técnica, se
encuentran en ascenso (Viana, 2021). La crioconservación de estos embriones
permite su almacenamiento sin que pierdan la capacidad de continuar su
desarrollo, lo que posibilita la ejecución de programas de transferencia en
gran magnitud y su comercio (Cabodevila y Teruel,
2001).
A pesar de la tendencia al incremento de los
embriones producidos in vitro, en el año 2020 se observó una ligera disminución
en cuanto a la crioconservación de estos. Esto se debe a las tasas
relativamente bajas de supervivencia, en comparación a las reportadas por su
contraparte in vivo (Viana, 2021). Por lo cual varios estudios se han enfocado
en perfeccionar los protocolos de crioconservación vigentes.
Las tecnologías más utilizadas son la
congelación lenta y la vitrificación, ambas técnicas poseen ventajas y
limitaciones, y difieren en cuanto su aplicación en condiciones de campo,
formación de cristales de hielo, estandarización de la técnica entre otros
aspectos (Ferré, 2020). El objetivo de esta revisión es describir el estado
actual de la congelación lenta y la vitrificación de embriones de interés
ganadero y sus perspectivas futuras.
DESARROLLO
Crioconservación
La crioconservación es una tecnología que
permite preservar órganos, tejidos y células, como son las células madres,
células sanguíneas, espermatozoides, ovocitos y embriones de muchas especies.
Además, posibilita el almacenamiento del material biológico por periodos
extensos de tiempo a una temperatura de -196oC, a la cual el nitrógeno se
encuentra en estado líquido (Pegg et al.,
2015). Varias fueron las investigaciones que intentaron la suspensión
estructural y funcional de estos y su posterior restauración; sin embargo, esto
no fue posible hasta que Polge et al. (1949) plantearon la inclusión de glicerol en el medio de la
crioconservación.
El éxito de esta técnica radica en la habilidad
de inducir y revertir, de una manera controlada, los cambios los que ocurren en
las células a bajas temperaturas, minimizando los daños que ocurren durante
este proceso (Bojic et al., 2021). Estos procesos constituyen un desafío ya que
provocan cambios mecánicos, tóxicos y osmóticos, que afectan la membrana
celular, las mitocondrias, el retículo endoplasmático y la expresión genética,
aumentando la muerte celular (Vining et al., 2021; Valente et al., 2022; Kurzella
et al., 2024). Cada tipo de célula
posee un conjunto de condiciones óptimas determinadas por la interacción de las
propiedades particulares de la célula en cuestión con los factores
criobiológicos (Pegg, 2015).
En el caso de los embriones, por ejemplo, la
ocurrencia de apoptosis como respuesta al estrés celular influye negativamente
en la habilidad posterior del embrión para eclosionar, debido a que la
expansión del blastocele se encuentra relacionado con el número total de
células que conforman el embrión (Santana et
al., 2020). Aunque, un adecuado protocolo de descongelación o
desvitrificación, tiene como resultado la regeneración y reorganización celular
de las estructuras embrionarias (Estudillo et
al., 2021).
La criopreservación
de embriones permite la mejora genética posibilita controlar enfermedades al
reemplazar la importación de animales y el uso eficiente de donantes y
receptoras, al otorgar una mayor flexibilidad en la disponibilidad de estas
últimas (Cabodevila y Teruel, 2001). Además, permite el establecimiento de bancos
de germoplasma dedicados a la conservación de razas y especies que se
encuentran en peligro de extinción (Blackburn et al., 2023).
Dentro de las técnicas de criopreservación
de embriones se encuentran la congelación lenta, la vitrificación y la
congelación ultrarrápida. Esta última es similar a la vitrificación, pero se
produce cristalización intra y extracelular. Otra técnica empleada es la
refrigeración, la cual consiste en el mantenimiento de los embriones a
temperaturas entre 0 y 4oC hasta 72 horas, por lo cual no se considera
crioconservación, sino una técnica intermedia entre esta y la transferencia en
fresco. La congelación lenta y la vitrificación son los dos procesos más
empleados (Cabodevila y Teruel, 2001).
Congelación
lenta
En la técnica congelación lenta, también
denominada congelación convencional, los embriones alcanzan su equilibrio
osmótico antes de comenzar el descenso de la temperatura y lo mantienen durante
el enfriamiento. Este equilibrio se lleva a cabo lentamente, permitiéndole a
los embriones contraerse y ceder agua en respuesta al incremento de la concentración
de la solución extracelular producto de la adición de crioprotectores (Cabodevila y Teruel, 2001).
Los crioprotectores incrementan la
concentración de solutos del sistema y producen la salida de agua intracelular,
lo que permite reducir la formación de hielo y estabilizar las membranas
celulares. Estos son sustancias de bajo peso molecular y solubles en agua, las
cuales se clasifican en intracelulares cuando pueden penetrar la membrana
plasmática (glicerol, dimetilsulfóxido, etanodiol, propanodiol, etilenglicol), o extracelulares (azúcares y
otras moléculas sintéticas) (Pegg, 2015).
Whittingham
et al. (1972) fueron los primeros en
realizar la congelación exitosa de embriones y obtener gestaciones. Los autores
sometieron embriones de ratón a soluciones con base de PBS (solución buffer
fosfato) con presencia de dimetilsulfóxido o glicerol. La disminución de la
temperatura se realizó mediante la utilización de hielo, induciendo la
cristalización, y posteriormente descendieron gradualmente durante periodos de
tiempo determinados hasta su introducción en nitrógeno líquido.
Este protocolo, denominado también método
estándar, varía de los protocolos actuales, modificando el uso de
crioprotectores y velocidades de enfriamiento, incluido el paso de seeding;
el cual se realiza entre -4 y -7ºC, tocando el envase de los embriones con una
pinza enfriada previamente a -196ºC, induciendo la formación de hielo
extracelular. El método de congelación fue posteriormente simplificado con la
inclusión de equipos programables (Cabodevila y
Teruel, 2001).
Varios son los crioprotectores empleados,
variando entre la especie y el protocolo a utilizar. Whittingham
et al. (1972) al trabajar con
embriones murinos obtuvieron una mayor tasa de supervivencia para aquellos
tratados con dimetilsulfóxido. Mientras que Barba (2016) obtuvo un mejor
resultado con etilenglicol en embriones de ovino, bovino y caprino,
respectivamente.
La utilización de protocolos con etilenglicol o
glicerol con sacarosa en bovino han permitido la implementación de la
transferencia directa, una técnica ampliamente utilizada en condiciones de
granja. Con este método es posible obtener altas y consistentes tasas de
gestación (Dochi, 2019). Monosacáridos y disacáridos
son usados frecuentemente como crioprotectores extracelulares, sin embargo, la
sacarosa y la trealosa son los más comúnmente
utilizados (Rajan y Matsumura, 2018). También son
empleadas macromoléculas sintéticas como el ácido hialurónico y el polivinilpirrolidona, las cuales garantizan condiciones de
congelación químicamente definidas (Barba, 2016). Estos medios también pueden
ser suplementados con
ascorbato, el cual reduce los niveles intracelulares de especies
reactivas de oxígeno y la fragmentación del ADN (Carrascal et al., 2022).
La aplicación los crioprotectectores
se encuentra limitada principalmente por su toxicidad, por lo cual una de las
principales tendencias en los últimos años fue la investigación de proteínas anticogelantes, una familia de biomoléculas producidas de
forma natural por varios organismos, como levaduras, insectos y peces, para
sustentar la vida en ambientes extremadamente fríos (Ekpo
et al., 2022). La extracción y sintésis de estas moléculas, y su posterior uso como
crioprotectores demostró su efectividad en semen (Jang
et al., 2020) y ovocitos bovinos (Sun et al.,
2020), así como en embriones de oveja (Li et
al., 2020; Correia et al., 2024)
por lo que el uso de biomoléculas en la crioconservación de embriones de
diferentes especies en se considera una perpectiva
prometedora.
Los protocolos de congelación lenta poseen una
alta estandarización, son los más utilizados industrial y comercialmente. Este
método permite mitigar el efecto de los factores que causan daño celular, como
son la toxicidad, los daños mecánicos, osmóticos y la formación de cristales de
hielo. Este último, con la evolución de los protocolos, fue minimizado a
niveles aceptables o eliminado completamente (Vajta y
Kuwayama, 2006).
Vitrificación
En la vitrificación es la técnica en la cual el
fluido pasa a un estado sólido viscoso no estructurado similar al vidrio, por
la cual adquiere su denominación; a diferencia de lo que ocurre en la
congelación, donde se forman cristales de hielo. Se efectúa una deshidratación
parcial de los embriones sin que estos alcancen su equilibrio osmótico (Cabodevila y Teruel, 2001).
Rall
y Fahy (1985) reportaron la primera vitrificación
exitosa de embriones de mamífero. Los autores equilibraron embriones murinos en
una solución vitrificante; los cuales fueron
sometidos por cortos períodos de tiempo a diferentes porcentajes de la
solución, en orden creciente, hasta observar la reducción del volumen de las
células al microscopio producto a la deshidratación. Este medio se formuló a
partir de una solución salina, la cual fue modificada con dimetilsulfóxido, acetamida, propilenglicol y polietilenglicol. Este trabajó
demostró que las concentraciones de los crioprotectores debían ser altas, ya
que, cuando se utilizaron menores concentraciones se obtuvo tasas más bajas de
sobrevivencia embrionaria, producto de la formación de cristales de hielo extra
e intracelular.
Una desventaja que posee la vitrificación es
que estas altas concentraciones crioprotectores ejercen efectos citotóxicos,
aun cuando los protocolos de vitrificación están diseñados para minimizar el
tiempo de exposición del blastocisto a estos compuestos (Fryc
et al., 2022). Aunque este efecto
puede ser minimizado por una adecuada selección y combinación de
crioprotectores, los cuales varían según el protocolo a utilizar (Souza et al., 2018), o la aplicación de
sustancias de origen natural como las proteínas anticogelantes.
Entre los intracelulares más empleados
encontramos el dimetilsulfóxido y el etilenglicol (Souza et al., 2018; Gómez et al.,
2020; Najafzadeh et
al., 2021). Mientras que, los azúcares destacan como los crioprotectores
extracelulares más empleados. Estos, al ser no penetrantes causan un gradiente
osmótico que reduce el contenido de agua intracelular, y consecuentemente
minimiza la formación de cristales de hielo en el interior de la célula (Rall, 1987). Entre los azúcares utilizados se encuentra la
glucosa y la sacarosa, que la sucrosa es más
efectiva; altas concentraciones de etilenglicol y dimetilsulfóxido combinadas
con sucrosa protegen al embrión durante el proceso de
vitrificación, que la utilización de bajas concentraciones de estos
crioprotectores extracelulares sin presencia del azúcar (Souza, et al. 2018).
La vitrificación regula el alza de los genes
que mejoran la criotolerancia, pero al mismo tiempo
podría desregular los genes que se requieren de manera crítica para la
implantación embrionaria, la función placentaria, la diferenciación celular y
el éxito de la gestación. Además, podría verse afectado los mecanismos
epigenéticos que regulan las vías apoptóticas y necróticas más adelante en el
desarrollo fetal, comprometiendo la supervivencia posterior a la transferencia
de embriones vitrificados (Arshad et al., 2021). Estudios realizados en
embriones ovinos vitrificados reportaron altas de recuperación de blastocistos;
sin embargo, estos poseían un menor número de blastómeros que su contraparte no
vitrificada (Fryc et
al., 2022).
Knetter
(2023) plantea que una misma especie puede mostrar diferentes porcentajes de criotolerancia en dependencia del estadio de desarrollo en
que se encuentre. Afirma que los estadios con menor número de células requieren
protocolos de vitrificación con una mayor velocidad de enfriamiento. Otro
factor que afecta el éxito de la técnica es la selección del dispositivo de
vitrificación donde se cargan los embriones; esta no es una decisión trivial,
la cual puede llegar a influir en la tasa de supervivencia de blastocistos y en
variaciones fenotípicas postnatales (Kim et
al., 2020; Garcia et al., 2020).
Los dispositivos utilizados se clasifican en
totalmente abiertos en los casos en que la muestra entra en contacto directo
con el nitrógeno líquido durante todo el procesamiento y almacenamiento.
Abiertos de almacenamiento cerrado, cuando estos disponen de un contenedor
adicional que pueda sellarse antes del almacenamiento, de modo que la muestra
está en contacto directo con el nitrógeno líquido durante el procedimiento,
pero no posteriormente. Se denominan semicerrados, si la muestra entra en
contacto con los vapores de nitrógeno; cerrados, si el soporte es abierto y el
contenedor es sellado antes del contacto con el nitrógeno líquido; y por último
se encuentran las pajuelas selladas (Vajta et al., 2015).
En experimentos realizados en conejo se
encontraron tasas de desarrollo similares entre embriones frescos y
vitrificados en dispositivos Cryotop, un dispositivo
abierto que carga menos de 1μL de medio de vitrificación, que en aquellos
embriones vitrificados minipajuelas de vitrificación
(0,125 mL de medio de vitrificación) (Garcia et al.,
2020). Oliveira et al. (2020)
plantean que un dispositivo de vitrificación abierto tiene la ventaja que
posibilita calentar directamente en la pajuela de transferencia.
Investigaciones recientes han demostrados que
la aspiración del fluido presente en el blastocele, y el consecuente colapso
del embrión, antes de realizar el proceso de vitrificación incrementa
significativamente las tasas de supervivencia (Umair et al., 2023; Martínez et al., 2024).
Transferencia
de embriones crioconservados
La descongelación y la desvitrificación
constituyen los procesos inversos a la congelación y la vitrificación,
respectivamente; en los cuales los embriones crioconservados
son llevados a las temperaturas fisiológicas. Si estos procedimientos se hacen
incorrectamente pueden dar lugar a cristales de hielos o los existentes sufrir
un crecimiento adicional, provocando un daño mecánico que compromete la vida
celular (Cabodevila y Teruel, 2001).
La velocidad de descongelación está determinada
por la temperatura a la que se detuvo la congelación lenta de los embriones
antes de ser inmersos en el nitrógeno líquido. Posteriormente a este paso, se
realiza la extracción del crioprotector en tantos pases por gotas de medio como
sean necesarios o se realiza la transferencia directa, en dependencia de los
reactivos y el protocolo utilizado durante la congelación (Cabodevila
y Teruel, 2001).
Un aspecto negativo de la transferencia directa
es que al prescindir de la evaluación morfológica las tasas de gestación
obtenidas suelen ser menores (Cabodevila y Teruel,
2001). No obstante, la mayor ventaja que posee es la implantación de un mayor
número de embriones en menor número de tiempo, y disminuye la interferencia en
la producción de leche. Los métodos de transferencia no directos requieren de
equipamiento, un área de laboratorio apropiada y consume más tiempo (Dochi, 2019)
En el caso de la desvitrificación de los
embriones almacenados en pajuelas, se realiza sumergiendo las pajuelas en agua
a 37o C y luego se sumergen en el medio de medio de desvitrificación (Vajta et al.,
2015). En el resto de sistemas de vitrificación se coloca la punta del
dispositivo, removiendo previamente el contenedor en los casos en los que los
requiera, directamente sobre una gota del medio apropiado para recuperar los
embriones (Canesin et al., 2020).
Los protocolos de desvitrificación requieren
que los embriones sean lavados sucesivamente en diferentes soluciones con el
fin de que el embrión se reexpanda, se extraigan las
altas concentraciones de crioprotectores, lo que puede causar un choque
osmótico y afectar su sobrevivencia, y su evaluación antes de ser transferidos.
Además, esto provoca que el proceso de transferencia consuma mayor tiempo (Loutradi et al.,
2008).
Oliveira et
al. (2020) plantearon un método de transferencia directa para la
vitrificación, en el que se utiliza un dispositivo abierto, el cual es
introducido con la ayuda de un adaptador en una pajuela en la que se encuentran
columnas con diferentes concentraciones de medio para su desvitrificación.
Aunque obtienen bajas tasas de gestación, se considera este protocolo
prometedor y todavía se encuentra en perfeccionamiento.
La adición de soluciones con presencia de
azúcares en el medio de descongelación o desvitrificación es beneficiosa para
el desarrollo posterior del embrión. Esto se debe a sus
características no penetrantes, que permiten su uso de manera efectiva en la
extracción de agentes crioprotectores altamente concentrados en los blastómeros
independientemente de cual sea el crioprotector intracelular utilizado (Schiewe et al.,
2020).
Schiewe
et al. (2020) informaron que un
producto natural, como la miel, compuesto predominantemente de fructosa y
glucosa, es una opción eficiente, de bajo costo y fácilmente disponible para
cualquier laboratorio en todo el mundo para extraer de forma segura
crioprotectores potencialmente tóxicos de las células antes de su
transferencia.
El uso como crioprotector de la melatonina, una
hormona con efecto antioxidante, se comenzó a investigar en los últimos años.
Estudios han determinado sus propiedades reguladoras del estrés oxidativo, la
peroxidación lipídica y la fragmentación del ADN durante la vitrificación de
embriones; así como aditivo en el medio de desvitrificación (Marcantonini et al.,
2022; Choi y Jang, 2022; Li et al., 2023). Además, la
melatonina regula la expresión de genes que son necesarios en la futura
implantación del embrión (Ivanov et al.,
2021).
Experimentos recientes encaminan las
investigaciones al uso de nanomateriales para la administración de
crioprotectores aumentando su penetración y disminuyendo la toxicidad de estos.
Además, el uso de nanopartículas magnéticas demostraron
una influencia positiva durante la desvitrificación, evitando la formación de
cristales de hielo durante este proceso (Jones et al; 2021; Choi y Jang, 2022; Wang et al., 2024; Doultani
et al., 2024)
¿Congelación
lenta o vitrificación?
De acuerdo con el reporte de la Asociación
Internacional de Transferencia de Embriones (IETS) efectuado en el año 2021,
aunque existe una tendencia en los últimos años a la reducción de embriones
obtenidos por colecta, un gran número de estos (58,4% del total de los
producidos por esta técnica) fueron transferidos luego de su crioconservación.
Mientras que, del total de embriones producidos in vitro que se transfirieron
solamente un 39,5% fueron embriones crioconservados.
Esto se debe a que la colecta de embriones es usada como una alternativa en
situaciones que requieran crioconservación, para compensar la baja criotolerancia de los embriones producidos in vitro (Viana,
2021), por lo que la elección del método de crioconservación adecuado en esta
biotecnología adquiere importancia.
La vitrificación tiene la ventaja de minimizar
las lesiones por las bajas temperaturas debido a que pasa rápidamente por las
temperaturas críticas. Además, evita el daño físico por la formación de
cristales de hielo, una de las principales causa el
daño físico a los embriones (Rall y Fahy, 1985). De esta manera protege temporalmente a una
mayor proporción de embriones del estrés por los daños ocurridos durante la
crioconservación, lo que da como resultado una mayor reexpansión embrionaria,
eclosión y supervivencia in vitro que el procedimiento congelación lenta. Sin
embargo, este mayor desarrollo embrionario in vitro no se acompaña siempre de
una mayor la supervivencia embrionaria después del proceso de transferencia (Arshad et al.,
2021).
La vitrificación es descrita como un método
simple, el factor que más influye en un método de vitrificación exitoso es la
habilidad y destreza del operador. A diferencia de la congelación lenta, la
vitrificación no requiere de equipos programables que promueven la
estandarización del proceso (Do y Taylor-Robinson, 2019). Sin embargo, esta
técnica no permite el procesamiento de altos volúmenes de embriones debido a
los múltiples pasos de equilibrio que requiere. Otra desventaja que posee es
que los métodos actuales de desvitrificación y los dispositivos existentes no
son compatibles con la transferencia directa, tan usada en el método de
congelación lenta (Ferré, 2020).
La amplia variedad de protocolos de
vitrificación, es otro aspecto a considerar, ya que estos que difieren en los
tiempos utilizados, temperaturas y la variación de los crioprotectores; además
el operador puede elegir entre soportes de vitrificación diferentes (pajuelas,
microgotas, cryotop, cryohook,
entre otros sistemas). El tamaño de la gota también varía, lo que afecta las
tasas de enfriamiento y desvitrificación del medio (Vajta
et al., 2015). Por lo tanto, se
considera que, aunque la vitrificación es una técnica ampliamente estudiada,
aún no se ha conseguido estandarizar sus procedimientos, lo que constituye un
inconveniente para su aplicación en la producción in vitro de embriones y en la
comercialización de estos (Do et al.,
2020)
Aunque, recientemente se ha desarrollado un dispositivo
automático para vitrificar ovocitos y embriones. Este equipo es capaz de
transportar las muestras biológicas, previamente cargadas en pajuelas, entre
las diferentes soluciones de vitrificación y equilibrio en intervalos de tiempo
predeterminado, y finalmente sumergirlas en nitrógeno. También realiza el
proceso de desvitrificación (Arav et al., 2018).
La calidad de los embriones es otro factor a
tomar en cuenta al elegir el método de crioconservación a utilizar. El alto
contenido de lípidos en los embriones producidos in vitro durante el periodo de
cultivo es uno de los factores que influyen en la criotolerancia
(Bradley y Swann, 2019), por lo que se considera en
estos casos la vitrificación una técnica más adecuada que la congelación lenta.
Esto se expresa en mayores tasas de supervivencia embrionarias (Bharti et al.,
2022). Sin embargo, estudios recientes se han enfocado en reducir la
sensibilidad de estos embriones adaptando las condiciones de cultivo para
reducir la acumulación de lípidos en el citoplasma mediante modificaciones en
los medios de cultivo in vitro (de Camargo et
al., 2022) o delipidación (Wu y Cheong, 2023). Najafzadeh et al. (2021) y Gonzalez
et al., (2022) también plantean que
la vitrificación es la alternativa más adecuada que la congelación en embriones
sometidos a biopsia.
CONCLUSIÓN
La congelación lenta y la vitrificación son
técnicas ampliamente utilizadas en la crioconservación de embriones. Aunque son
varios los autores que se decantan por la vitrificación, por ser es una técnica
económica y rápida, que evita los daños físicos provocados por la formación de
los cristales de hielo; esta requiere de un mayor entrenamiento por parte del
operador y no posee una alta estandarización como la congelación lenta. Además,
la técnica de descongelación se adapta más a las condiciones de campo que la
desvitrificación. Investigaciones recientes se enfocan en la solución de las
principales limitaciones de estas técnicas, enfocándose fundamentalmente en la
sustitución de crioprotectores por sustancias de menor citoxicidad.
La idoneidad de un método u otro varía según la
especie a trabajar, las condiciones de trabajo y los protocolos utilizados para
la obtención de los embriones, queda a decisión del investigador encontrar la
técnica óptima para su laboratorio.
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Concepción y
diseño de la investigación: HNQ; análisis e interpretación de los datos: HNQ; redacción del artículo: HNQ.
Los autores declaran que no existen
conflictos de intereses.