Abstract
Background: Female rabbits have induced
ovulation, they requires mating by a male or the
administration of exogenous substances, such as GnRH analogs. However, the cost
and availability of these hormones limit their systematic application and may
compromise the continuity of genetic improvement programs in developing
countries. Objective. Evaluate the
efficacy of the GnRH-CIGB obtained by chemical synthesis, applied in a hormonal
protocol for artificial insemination in White Semigiant
rabbits. Materials and methods: The
study was conducted in the CIMAGT, with 15 female rabbits. For estrus
synchronization, 25 IU of eCG were administered 48
hours before insemination. Ovulation was induced by natural mating or using
GnRH analogs, depending on the experimental group. A
completely randomized design with 5 animals per treatment was used. Group 1
received direct mating, group 2 received buserelin,
and Group 3 received CIGB-GnRH. In group 1 and 2, timed artificial insemination
(TAI) was performed Pregnancy was diagnosed at 12 days. The statistical
analysis performed was the extension
Freeman-Halton of the Fisher exact probability test for contingency table 2x3. Results: No significant differences
were found between the different treatments. An 80% pregnancy rate was achieved
with direct mating, 100% with buserelin, and 80% with
GnRH-CIGB; Conclusions: Evidence of
effectiveness he efficacy of GnRH-CIGB within an artificial insemination
protocol in rabbits.
Keywords: analog, artificial insemination, chemical
synthesis, GnRH (Source: AGROVOC)
INTRODUCCIÓN
La
inseminación artificial (IA) con semen fresco y refrigerado es una de las
biotecnologías de la reproducción más difundidas, especialmente en los países
europeos, donde se utiliza en el 80 % de los sistemas de producción (Sakr et al.,
2019; García et al., 2020). Desde principios de la década de los ochenta
se aplica en la especie cunícula; un período reciente
en comparación con el ganado bovino, porcino y ovino, aunque mantiene una
evolución notable (Quintela et al., 2023).
Su
implementación permite establecer programas de cría eficientes y ciclos de
producción ordenados (Sakr et al., 2019),
aumenta el rendimiento reproductivo de los animales, disminuye el número de
machos en la granja y optimiza los recursos humanos (Munari
et al., 2019). Además, permite la
mejora genética en un menor periodo de tiempo porque aumenta el número conejas
utilizadas como reproductoras anualmente y disminuye el intervalo entre partos
(Dadashpour et
al., 2022).
Varios son
los factores que influyen en el comportamiento reproductivo de la hembra
adulta, entre ellos, la salud, las condiciones del medio y la fisiología del
animal (Rebollar et al., 2023). Las
conejas tienen ovulación inducida y precisa de la monta del macho o de la
estimulación artificial (Kumcu et al., 2024). La introducción del catéter de IA en la vagina no es
suficiente para que la totalidad de las conejas inseminadas ovulen (Rebollar et al., 2012). Es por ello que en los
programas de IA se necesita la aplicación de sustancias exógenas, como las
hormonas, que desencadenen la ovulación (Mattioli et al., 2021).
Entre las
sustancias más utilizadas se encuentran los análogos de la hormona liberadora
de gonadotropina (GnRH), como gonadorelina, licerelina
y buserilina, que aplican por vía intravaginal o
intramuscular (i.m), siendo esta última la más común
(Mattioli et al.,
2021). Estos no generan respuesta inmune e inducen tasas de ovulación similares
a los de la monta natural, porque provocan la descarga hormonal necesaria para
inducir la ovulación de modo repetido, sin que se afecte la fertilidad y
prolificidad. El pico de LH se desencadena aproximadamente dos horas después de
la inyección i.m., por lo que la IA se realiza
durante este período (García et al.,
2020).
Sin
embargo, a pesar de las ventajas de estas hormonas, sus costos y la
disponibilidad de insumos limitan su empleo sistemático y pueden comprometer la
continuidad de los programas de mejoramiento genético en los países en
desarrollo (Colazo y Mapletoft, 2022). En este
contexto, la producción nacional de análogos de GnRH mediante síntesis química
constituye una alternativa estratégica para garantizar la autonomía tecnológica
y reducir la dependencia de importaciones.
El objetivo
de este trabajo es evaluar la eficacia de la GnRH-CIGB obtenida por síntesis
química, en un protocolo hormonal para la inseminación artificial en conejas de
la raza Semigigante Blanco.
MATERIALES Y MÉTODOS
El estudio
se realizó en el Centro de Investigaciones para el Mejoramiento Animal de la
Ganadería Tropical (CIMAGT), ubicado en el municipio Cotorro, provincia La
Habana. Se utilizaron 15 conejas (Oryctolagus cuniculus) multíparas no lactantes de la raza
Semigigante Blanco, las cuales se dividieron en tres grupos de cinco animales
alojadas en jaulas individuales. Estas fueron colocadas en una misma batería
evitando el efecto de la posición de la nave sobre los ejemplares. Los animales
recibieron una dieta mixta (40% de concentrado y 60% de forraje) según los
requerimientos nutricionales y agua ad
libitum. Para la sincronización del estro, se
aplicaron 25 UI de Gonadotropina Coriónica Equina (Novormon,
Syntex) por vía i.m 48 horas antes de la IA
permitiendo la estimulación y sincronización de la maduración ovárica según lo
planteado por Theau-Clément (2007).
Se
emplearon 4 sementales Semigigante, Nueva Zelanda, Chinchilla y Pardo, cuyas
edades estaban comprendidas entre 17 y 24 meses, con peso vivo superior a 2,5
kg y una fertilidad probada mediante el nacimiento de crías vivas. La
extracción del semen se realizó con una vagina artificial atemperada a 45ºC, en
presencia de una hembra en celo. Inmediatamente después de la colecta, se
retiró la fracción gelatinosa o tapón mucoso y se efectuó la valoración de los
eyaculados.
A las
muestras de semen obtenidas se les determinó el volumen mediante un colector
graduado, la motilidad subjetiva por valoración al microscopio óptico marca
OLYMPUS CX41 con aumento de 40x y la concentración espermática mediante conteo
en cámara de Neubauer. Se procesaron
los eyaculados que presentaran un color blanco, volumen superior a 0,2 ml y más
de 65% de motilidad. A partir de estos eyaculados se formuló un pool heteroespermático,
con el fin de disminuir el efecto del semental sobre la tasa de concepción y mejorar la
eficacia de la IA
(Beatty, 1960). Se llevó a una concentración espermática de 10 x 106sp/ml
utilizando el Diluyente para Semen de Conejos (INSERBO.S.L), previamente
atemperado a 37ºC.
Antes de
efectuar la IA se evaluó la coloración de la mucosa vulvar
según Chen et al.
(2023) como indicador de la presencia de celo. La inducción
de la ovulación se realizó por monta natural o IA empleando análogos de la
hormona GnRH por vía i.m. según el grupo
experimental; se utilizó un diseño completamente aleatorizado con 5 animales
por tratamiento. En el grupo 1 se realizó monta directa con los sementales
empleados para la IA respetando el tiempo de reposo necesario para disminuir el
efecto sobre la calidad del semen, 30 minutos (Vicente et al., 2014). En el grupo 2 se usó el preparado comercial Acetato
de Buserelina (Maxrelin®, Aluren; 0,0084 mg/mL). El grupo 3
fue tratado con el fármaco de producción nacional Acetato de gonadorelina (CIGB-GnRH; 0,1
mg/mL) de probada eficiencia en protocolo de IATF en novillas
por Sánchez et al. (2025).
Para
realizar la IA se introdujo la varilla de inseminación con la parte acodada
hacia la región dorsal de la vagina, evitando la introducción en la uretra;
pasada la pelvis la varilla se giró 180° y se introdujo entre 10-12 cm, al
topar el cérvix se depositó 0,5 ml de semen (Díaz et al., 1989). A los 12 días posteriores a la IA se realizó el
diagnóstico de la gestación por el método de palpación abdominal y
ultrasonografía (PT50A Vet, BMV Technology).
Se realizó la extensión Freeman-Halton
de la prueba de probabilidad exacta de Fisher para una tabla de contigencia de 2x3 (a=0,05) en VassarsStats:
Statistical Computational Website (https://vassarstats.net).
RESULTADOS Y
DISCUSIÓN
En la Tabla 1 se observa no existieron diferencias significativas en
cuanto al número de conejas gestantes entre los tratamientos aplicados. El
análisis estadístico indica que no hubo diferencias estadísticamente
significativas entre los distintos tratamientos. Estos resultados concuerdan
con experimentos anteriormente realizados con GnRH-CIGB, al aplicarse en un
protocolo de IATF en novillas Siboney de Cuba, no se encontraron diferencias
significativas entre la utilización de este fármaco y el Maxrelin
(Sánchez et al., 2025).
Tabla 1. Cantidad de conejas diagnosticadas como gestantes o no gestantes según
el tratamiento aplicado para inducir la ovulación, monta directa, aplicación de
Maxrelin o GnRH-CIGB. Extensión Freeman-Halton de la prueba de
probabilidad exacta de Fisher (n=5, gl=2, *p>0,05).
|
Tratamiento
|
Animales
gestantes
|
Animales
no gestantes
|
|
Monta Directa
|
4
|
1
|
|
Maxrelin
|
5
|
0
|
|
GnRH-CIGB
|
4
|
1
|
Se alcanzó un 80% de gestación en los animales con monta directa, 100%
para los tratados con Buserelina y un 80% para los
tratados con GnRH-CIGB (Fig. 1). Resultados
similares obtuvieron Rebollar et al.
(2012) y Viudes de Castro et al.
(2024) al aplicar buserelina i.m
en conejas, con un 87,5% y 77% de tasas de gestación, respectivamente. Estos
autores también comprobaron la ovulación mediante laparoscopía obteniendo un
100% y un 80% de hembras que ovularon, respectivamente.
Figura 1. Tasa de conejas gestantes según el tratamiento aplicado para inducir la
ovulación, monta directa, aplicación de Maxrelin o
GnRH-CIGB.
Empleando
la tasa de concepción como indicador de inferencia de la ovulación, se obtienen
indicios de la capacidad de GnRH-CIGB de inducir la ovulación en las conejas.
Lo que sugiere que la administración exógena de GnRH fue capaz de generar la
estimulación necesaria para desencadenar la cascada hormonal requerida en el
proceso de ovulación, simulando las señales neuronales que se activan durante
la copula (García et al., 2020; El
Ratel et al., 2020). Estos
resultados deben ser confirmados en estudios a mayor escala, dadas las limitaciones
del tamaño de la muestra.
CONCLUSIONES
Se
obtuvieron indicios de la eficacia de la de GnRH-CIGB dentro de un protocolo de
IATF en conejos, alcanzando valores de tasa de gestación semejantes a los
obtenidos con la administración de un fármaco comercial como la buserelina y con animales en monta directa. Estos indicios
deben confirmarse en un estudio a mayor escala.
REFERENCIAS
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Contribución
de los autores
Concepción
y diseño de la investigación: TSG, MLHG,
ALM, JMSP, MPEG, YSP; análisis
e interpretación de los datos: TSG, MLHG,
JMSP, HNQ, redacción del artículo: TSG, MLHG, ALM, HNQ
Conflicto
de intereses
Los
autores declaran que no existe conflicto de intereses.
, Mara Laura Hernández
García *